過硫酸氫鉀復合鹽高含量產品可做為消毒劑使用,但其相對傳統消毒劑到底具備什么樣的優勢?其針對普通的水產動物病原菌在相關效果上到底表現如何?為了科學的回答這些問題,連云港永榮生物科技有限公司委托西南大學做出相應數據,希望對同行及相關養殖戶有所借鑒。
過硫酸氫鉀復合鹽對五種水產動物病原菌的敏感性研究
不同濃度條件下,試驗了過硫酸氫鉀對5種水產動物常見病原菌,包括柱狀曲撓桿菌、熒光假單胞菌、嗜水氣單胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌的藥物敏感性。結果表明:過硫酸氫鉀對這幾種病原菌的MIC為3.1~5.7mg /L之間,MBC為4.5~8.3 mg /L之間。【關鍵詞:過硫酸氫鉀 病原菌 藥物敏感性】
一、材料與方法
1.1 材料
1.1.1 菌種
試驗菌株選擇水產養殖魚類的常見致病菌,試驗菌株取自農業部漁業動植物病原庫。
1.1.2 試驗藥品
試驗藥品"過硫酸氫鉀"本試驗所使用的過硫酸氫鉀由連云港永榮生物科技有限公司提供,具體產品信息見表1。
表1 過硫酸氫鉀產品信息
編號 | 產品名稱或公司名字 | 有效成分含量(%) | 劑型 |
S1 | 德國某公司 | 50% | 粉劑 |
S2 | 福建某公司 | 50% | 粉劑 |
S3 | 美國某公司 | 50% | 粉劑 |
S4 | 上海某公司 | 50% | 粉劑 |
S5 | 浙江某公司 | 50% | 粉劑 |
S6 | 浙江某公司 | 50% | 顆粒 |
S7 | 福建某公司 | 50% | 顆粒 |
S8 | 上海某公司 | 50% | 顆粒 |
S9 | 連云港永榮 | 50% | 片劑 |
S10 | 連云港永榮 | 50% | 粉劑 |
1.1.3 培養基
選用肉汁胨培養基:蛋白胨10g,牛肉膏5g,NaCl 5g,H2O 1000mL,pH 7.2~7.4,1.05 kp滅菌20min。
1.2 方法
1.2.1 菌懸液的制備
將各菌株接種到已滅菌的培養基上,培養24-48h后刮取菌苔,置于無菌生理鹽水中搖勻,離心2次(4500r/min,每次20min),收集沉淀,重懸于無菌生理鹽水中,參照麥氏比濁管將菌液稀釋到約107 CFU/mL。
1.2.2 藥液配制
過硫酸氫鉀用無菌水稀釋1000mg/L備用。
1.2.3 抗菌效果試驗
1.2.3.1 藥物敏感性試驗
藥敏試驗采用濾紙片法,根據抑菌圈的大小,來判斷菌種對藥物的敏感性,是敏感,中度敏感還是耐藥。干燥紙片的制備方法:選用吸水力強而且質地均勻的濾紙,用打洞機制成6mm直徑的圓紙片,120℃干燥滅菌2小時。然后把配制好的各種適宜濃度的藥液,每100張紙片加入1.0mL藥液,使它均勻浸潤,放在無菌平皿中,37℃使它干燥,分裝小瓶中并封口,4℃保存。采用平板擴散法將培養的試驗菌株以無菌水制成約106 CFU/mL的菌懸液,移取100 μL菌懸液至肉汁胨固體培養基上,推樣器推勻,稍干后鑷取無菌圓紙片貼放于接種過試驗菌株的平皿培養基表面,使每片含100μg的藥物,28℃恒溫培養24h后,游標卡尺測量抑菌圈直徑(鄭鈞鏞等,1989),見表2。
1.2.3.2 最小抑菌濃度(MIC)測定試驗
使用試管稀釋法。吸取預先配制好的藥物母液1mL,加入滅菌試管中,加無菌水至9mL,每一試管再移取菌懸液1mL(預先培養18h,濃度約為107cfu/mL),混勻,28℃恒溫培養,24h后每管移取1mL至9mL無菌肉汁胨液體培養基內培養,肉眼觀察,含最小量尚呈明顯不混濁的試管所含藥物的濃度為最小抑菌濃度(MIC) ,見表3,4。
1.2.3.3 最小殺菌濃度(MBC)測定試驗
按液體培養基稀釋法的操作方法測了藥物的MIC,然后把未長出菌的各個試管培養液分別移種到無菌平板上,培養后凡是平板上無菌生長的藥物最低濃度就是最小殺菌濃度(MBC),見表4。
結果
2.1 過硫酸氫鉀對不同病原菌的敏感性
表1 不同細菌對過硫酸氫鉀的敏感性
注:S-敏感;R-不敏感。
2.2對幾株細菌的最小抑菌濃度(MIC)試驗
過硫酸氫鉀對5株細菌的抑菌試驗結果。“+/-”表示,2個平行組中1個為“+”、1個為“-”;“+”或“-”表示,2個平行組的結果相同,同為“+”或“-”, “+”表示有細菌生長,而“-”表示無細菌生長。每種病原菌的每個濃度梯度均設1個不加藥物的陰性對照,以便于區別渾濁是由細菌繁殖造成還是藥物本身產生的渾濁,抑或細菌由于其它原因造成了死亡(表2)。
表2 過硫酸氫鉀對幾株細菌的殺滅效果 (mg / L)
過硫酸氫鉀對柱狀曲撓桿菌等的MIC值見表3。
表3 過硫酸氫鉀對幾株細菌的最小抑菌濃度(MIC)(mg / L)
編號 | 柱狀曲撓桿菌 | 熒光假單胞菌 | 嗜水氣單胞菌 | 副溶血弧菌 | 溶藻弧菌 |
S1 | 3.7 | 4.2 | 3.8 | 4.9 | 5.1 |
S2 | 3.1 | 3.5 | 3.8 | 4.0 | 4.2 |
S3 | 3.8 | 4.3 | 4.5 | 4.8 | 5.1 |
S4 | 5.1 | 5.8 | 3.6 | 4.8 | 4.6 |
S5 | 4.7 | 5.7 | 4.8 | 4.7 | 4.6 |
S6 | 3.4 | 4.8 | 3.6 | 4.9 | 5.2 |
S7 | 3.6 | 4.9 | 3.5 | 3.8 | 3.4 |
S8 | 4.8 | 3.4 | 3.8 | 5.6 | 5.7 |
S9 | 3.5 | 3.7 | 3.6 | 3.8 | 3.7 |
S10 | 3.3 | 3.4 | 3.2 | 3.8 | 4.0 |
2.3對幾株細菌的最小抑菌濃度(MBC)試驗
過硫酸氫鉀對柱狀曲撓桿菌等的MBC值見表4。
表4 過硫酸氫鉀對幾株細菌的最小殺菌濃度(MBC) (mg / L)
編號 | 柱狀曲撓桿菌 | 熒光假單胞菌 | 嗜水氣單胞菌 | 副溶血弧菌 | 溶藻弧菌 |
S1 | 5.6 | 6.3 | 5.7 | 7.4 | 7.7 |
S2 | 4.5 | 5.3 | 5.7 | 6.0 | 6.1 |
S3 | 5.7 | 6.5 | 6.8 | 7.5 | 7.7 |
S4 | 7.7 | 8.7 | 5.4 | 7.2 | 6.4 |
S5 | 7.1 | 8.6 | 7.2 | 7.1 | 6.9 |
S6 | 5.1 | 7.1 | 5.8 | 7.4 | 7.5 |
S7 | 5.4 | 7.4 | 5.3 | 5.7 | 5.1 |
S8 | 7.2 | 5.1 | 5.7 | 8.3 | 8.0 |
S9 | 5.3 | 5.6 | 5.4 | 5.7 | 5.6 |
S10 | 5.0 | 5.1 | 4.8 | 5.7 | 6.0 |
結論
過硫酸氫鉀對水產動物常見病原菌有較強的抗菌力,過硫酸氫鉀對試驗的5種病原菌的MIC為3.1~5.7mg/L之間,MBC為4.5~8.3 mg/L之間。
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