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過硫酸氫鉀對水產動物病原菌的敏感性研究

瀏覽次數：日期：2017/1/24 0:43:03

　　文/西南大學（榮昌校區）魚類繁殖與健康養殖中心

　　中國水產頻道獨家報道，過硫酸氫鉀復合鹽雖然在水產上應用很久，但針對相關細菌缺少對應數據。2016年，連云港永榮生物科技有限公司委托相關院校做出兩篇相應數據，希望對同行及相關養殖戶有所借鑒

　　摘要：不同濃度條件下，試驗了過硫酸氫鉀對5種水產動物常見病原菌，包括柱狀曲撓桿菌、熒光假單胞菌、嗜水氣單胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌的藥物敏感性。結果表明：過硫酸氫鉀對這幾種病原菌的MIC為3.1——5.7mg/L之間，MBC為4.5——8.3mg/L之間。

　　1材料與方法

　　1.1材料

　　1.1.1菌種

　　試驗菌株選擇水產養殖魚類的常見致病菌，試驗菌株取自農業部漁業動植物病原庫。

　　G4柱狀曲撓桿菌Flexibactercalumnaris

　　56-12-10熒光假單胞菌Pseudomonasfluorescens

　　ST78-3-3嗜水氣單胞菌A.hydrophilahydrophila

　　58-20-9副溶血弧菌Vibrioparahemolyticus

　　BYK00056-11-24溶藻弧菌Vibrioalginolyticus

　　1.1.2試驗藥品

　　試驗藥品＂過硫酸氫鉀＂本試驗所使用的過硫酸氫鉀由連云港永榮生物科技有限公司提供，具體產品信息見表1。

　　1.1.3培養基

　　選用肉汁胨培養基：蛋白胨10g，牛肉膏5g，NaCl5g，H2O1000mL，pH7.2——7.4，1.05kp滅菌20min。

　　1.2方法

　　1.2.1菌懸液的制備

　　將各菌株接種到已滅菌的培養基上，培養24——48h后刮取菌苔，置于無菌生理鹽水中搖勻，離心2次(4500r／min，每次20min)，收集沉淀，重懸于無菌生理鹽水中，參照麥氏比濁管將菌液稀釋到約107CFU／mL。

　　1.2.2藥液配制

　　過硫酸氫鉀用無菌水稀釋1000mg/L備用。

　　1.2.3抗菌效果試驗

　　1.2.3.1藥物敏感性試驗

　　藥敏試驗采用濾紙片法，根據抑菌圈的大小，來判斷菌種對藥物的敏感性，是敏感，中度敏感還是耐藥。干燥紙片的制備方法：選用吸水力強而且質地均勻的濾紙，用打洞機制成6mm直徑的圓紙片，120℃干燥滅菌2小時。然后把配制好的各種適宜濃度的藥液，每100張紙片加入1.0mL藥液，使它均勻浸潤，放在無菌平皿中，37℃使它干燥，分裝小瓶中并封口，4℃保存。采用平板擴散法將培養的試驗菌株以無菌水制成約106CFU／mL的菌懸液，移取100μL菌懸液至肉汁胨固體培養基上，推樣器推勻，稍干后鑷取無菌圓紙片貼放于接種過試驗菌株的平皿培養基表面，使每片含100μg的藥物，28℃恒溫培養24h后，游標卡尺測量抑菌圈直徑(鄭鈞鏞等，1989)，見表2。

　　1.2.3.2最小抑菌濃度(MIC)測定試驗

　　使用試管稀釋法。吸取預先配制好的藥物母液1mL，加入滅菌試管中，加無菌水至9mL，每一試管再移取菌懸液1mL(預先培養18h，濃度約為107cfu／mL)，混勻，28℃恒溫培養，24h后每管移取1mL至9mL無菌肉汁胨液體培養基內培養，肉眼觀察，含最小量尚呈明顯不混濁的試管所含藥物的濃度為最小抑菌濃度(MIC)，見表3，4。

　　1.2.3.3最小殺菌濃度(MBC)測定試驗

　　按液體培養基稀釋法的操作方法測了藥物的MIC，然后把未長出菌的各個試管培養液分別移種到無菌平板上，培養后凡是平板上無菌生長的藥物最低濃度就是最小殺菌濃度（MBC），見表4。

　　2結果

　　2.1過硫酸氫鉀對不同病原菌的敏感性

　　表1 不同細菌對過硫酸氫鉀的敏感性

　　注：S——敏感；R——不敏感。

　　2.2對幾株細菌的最小抑菌濃度（MIC）試驗

　　過硫酸氫鉀對5株細菌的抑菌試驗結果�！�+/-”表示，2個平行組中1個為“+”、1個為“-”；“+”或“-”表示，2個平行組的結果相同，同為“+”或“-”，“+”表示有細菌生長，而“-”表示無細菌生長。每種病原菌的每個濃度梯度均設1個不加藥物的陰性對照，以便于區別渾濁是由細菌繁殖造成還是藥物本身產生的渾濁，抑或細菌由于其它原因造成了死亡（表2）。